【摘要】 目的探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法应用溶血空斑实验和单核巨噬细胞吞噬功能实验，探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响。结果桦褐孔菌多糖能使小鼠抗体分泌细胞数明显增多，明显的提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。结论桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能有促进作用。
【关键词】 桦褐孔菌多糖； 小鼠； 免疫功能
桦褐孔菌Fuscoporia obiqua ( Pers ：Fr．)Aoshi，属于真菌门、担子菌亚门、层菌纲、非褐菌目(无褶菌目=多孔菌目，多孔菌科)、褐卧孔菌属(纤孔菌属)。桦褐孔菌在民间主要用于预防和治疗各种疑难杂症，如各种恶性肿瘤、糖尿病、心血管疾病、肝病及艾滋病等〔1〕。本实验从桦褐孔菌中提取多糖，应用溶血空斑实验和单核巨噬细胞吞噬功能实验观察了对小鼠免疫功能的影响。
1 材料
1.1 动物
昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，由延边大学医学部动物科提供。
1.2 药品与试剂
桦褐孔菌多糖的制备：将桦褐孔菌粉碎称重，加适量水浸泡，煎煮3次，过滤，合并滤液，浓缩；加入浓度95%乙醇使含乙醇量达80％，放置24 h，过滤收集沉淀，用高浓度乙醇洗涤，干燥，再次醇沉，干燥后最终得褐色桦褐孔菌多糖。补体：取豚鼠新鲜血清，使用前加1ml沉积羊红细胞于20～30 ml豚鼠血清中，置4℃吸附20 min，离心取上清，用PBS液稀释成1∶5的补体。绵羊红细胞：取新鲜羊颈静脉血10 ml装在500 ml无菌的带有小玻璃珠的烧瓶中， 20 min后，用PBS液洗涤3次，配成含50%的绵羊红细胞的液体。鸡红细胞：用生理盐水稀释鸡红细胞达到5%鸡红细胞悬液。固定液为1∶1丙酮-甲醇溶液。染色液：4%（v/v）Giemsa-磷酸盐缓冲液。
2 方法
2.1 对小鼠溶血空斑形成的影响取60只小鼠，随机分为6组，分别为生理盐水对照组及桦褐孔菌多糖50，100，200，400，800 mg/kg 5个剂量组，灌胃1次/d，共14 d。给药后第10天每只小鼠用1∶200绵羊红细胞0.5 ml腹腔注射进行免疫，继续灌胃4 d后将小鼠处死，无菌取脾，按文献方法测溶血空斑形成实验〔2，3〕。
2.2 腹腔巨噬细胞吞噬功能检测取小鼠20只，随机分为生理盐水组和桦褐孔菌多糖200 mg/kg组，每组10只，给药方法同上，于实验前4 d腹腔注射0.5%淀粉生理盐水溶液，每只小鼠0.5 ml，4 d后每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞悬液0.5 ml， 12 h后，处死小鼠；仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹膜注入生理盐水2 ml，轻轻按揉鼠腹部1 min，然后吸出腹腔洗液1 ml，分滴于两片载玻片上，方入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30 min。以生理盐水漂洗，以除去未与载玻片黏附的细胞，晾干。1∶1丙酮-甲醇溶液固定5 min。4%（v/v）Giemsa-磷酸盐缓冲液染色3 min，流水冲洗，晾干〔4〕。