作者：伍庆，张明时，王兴宁，曹桂红
【摘要】 目的 建立同时测定杜仲药材中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷含量的高效液相色谱法。方法采用Diamonsil C18柱（5 μm ，250 mm×4.6 mm），以乙腈-水-0.4%磷酸水溶液（15∶85∶0.5）为流动相，检测波长227 nm。结果样品中绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的加样回收率分别为95%～98%，96% ～103%；绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷的线性范围分别为0.298～2.98 μg，r=0.999 9和0.872～8.72 μg ，r=0.999 8。结论贵州不同产地杜仲药材皮及叶中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的含量差异很大。
【关键词】 高效液相色谱法； 杜仲； 绿原酸； 松脂醇二葡萄糖苷
Abstract：ObjectiveTo establish a new HPLC method for simultaneous determination of chlorogenic acid（CGA）and pinoresind diglucoside（PDG）in E.ulmoides Oliv..MethodsCGA and PDG were analyzed by Diamonsil C18 column (5 μm ，250 mm×4.6 mm ) with detector at 227 nm,and the mobile phase consisted of CH3CN-H2O-H2PO3(15∶85∶0.5).ResultsThe recoveries of CGA and PDG were 95%～98%，96%～103% respectively. The linear ranges were 0.298～2.98 μg with a regression coefficient of 0.999 9 for chlorogentic acid and 0.872～8.72 μg with a regression coefficient of 0.999 8 for pinoresind diglucoside. ConclusionQuantitative analysis showed that there was considerable difference for the contents of CGA and PDG in the barks and leaves of E. ulmoides Oliv. From difference growing areas in Guizhou.
Key words：HPLC； Eucommia ulmoides Oliv.； Chlorogenic acid； Pinoresind diglucoside
杜仲属国家二级保护植物，是杜仲科杜仲属的落叶乔木，中国特有植物种，系地质史上第四纪冰川运动残留下来的占生孑遗树种〔1，2〕。杜仲具有消炎、补肾降压、增强人体免疫力、抗疲劳、抗衰老、多种药理作用，其中，绿原酸（chlorogenic acid，CGA）和松脂醇二葡萄糖苷（pinoresind diglucoside,PDG）为杜仲药材中重要的活性物质〔3，4〕。近年来对杜仲药材的研究多限于杜仲叶活性成分的定量分析，而对杜仲皮中这两种活性成分定量分析甚少〔5〕，为了充分合理的开发利用杜仲资源，本文采用高效液相色谱法同时对杜仲皮及叶中的绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷进行了定性定量分析。方法简便、快速、准确，有助于杜仲药材及产品的质量控制和评价。
1 仪器与试药
日本岛津Shimadzu LC-10ATvp高效液相色谱仪，SPD- 10Avp检测器，HW-2000 工作站（上海千谱）。
绿原酸对照品（批号753-200311）及松脂醇二葡萄糖苷（由贵州德祥制药有限公司赠送纯度大于99%）对照均购于中国药品生物制品检定所；杜仲皮及叶均采自贵州各杜仲药材基地（经贵阳中医学院刘传汉老师鉴定）；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯；水为二次重蒸水。
2 方法与结果
2 .1 溶液的制备
2.1.1 对照品储备液
分别精密称取对照品适量，用60%甲醇溶解后置于25 ml的容量瓶，并稀释至刻度，配置成含绿原酸1.49 mg・ml-1,松脂醇二葡萄糖苷4.35 mg・ml-1的对照品储备溶液。
2.1.2 对照品溶液
分别精密吸取对照品储备溶液1ml，置于10 ml的容量瓶中，用60%甲醇溶解并稀释至刻度，配置成含绿原酸0.149 mg・ml-1，松脂醇二葡萄糖苷0.435 mg・ml-1的对照品溶液。
2.1.3 供试品溶液
精密称取杜仲药材粉末（过60目筛）2 g，于100 ml锥形瓶中，加入25 ml 60%甲醇溶液，称定重量，在水浴上回流提取1 h，冷却后用相应的醇浓度补足重量。经0.45μm的滤膜滤过，续滤液供HPLC分析。