作者：朴花子，张成镐，方宇辉
【关键词】 泼尼松龙；小胶质细胞；RANTES；脂多糖
摘要：目的 探讨泼尼松龙对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞激活时所分泌的趋化因子RANTES的影响。 方法 采用MEM培养液培养小胶质细胞，培养液中添加不同质量浓度的LPS(0、100、500、1000μg/L)及LPS(100μg/L)与10μmol/L的泼尼松龙后再培养12h，用ELISA法测定细胞外液所分泌的RANTES含量。结果 LPS能高度激活小胶质细胞并且能使RANTES分泌增加，泼尼松龙明显抑制RANTES的含量。 结论 泼尼松龙有抑制趋化因子RANTES的分泌作用。
关键词：泼尼松龙；小胶质细胞；RANTES；脂多糖
Effect of prednisolone on LPSinduced RANTES productionPiao Huazi, Zhang Chenggao, Fang Yuhui
KEY WORDS: prodnisolone; microglia; RANTES; lipopolysaccharide
小胶质细胞作为中枢神经系统的一种组织巨噬细胞，在中枢神经系统疾病中起重要作用[12]。研究显示，静息状态的小胶质细胞缺乏巨噬细胞样功能，但大脑受损伤时可激活小胶质细胞，一方面可通过与神经细胞直接接触， 发挥脑内吞噬细胞的毒性作用；另一方面是分泌的一些炎症介质如一氧化氮(nitric oxide, NO)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha, TNFα)、白细胞介素1(interleukin1, IL1)、趋化因子monocyte chemotactic protein1(MCP1) 和regulated upon activation normal T cell expressed and secreted (RANTES)等，导致继发性脑损伤。趋化因子是一类对白细胞游走和活化具有重要作用的蛋白超家族，除了具有对T细胞的募集功能外，还能参与调控多种生物过程， 如细胞黏附、吞噬、细胞因子产生、T细胞激活、血管生成与增殖等[34]。在各种原因所致的脑损伤过程中，趋化因子分泌增加，使炎症反应不断放大，会进一步加重脑损伤[5]。糖皮质激素类由于具有抗炎、稳定细胞膜的作用，多年来一直被作为重型颅脑损伤的重要辅助治疗药物之一[6]。泼尼松龙属于中效肾上腺皮质激素类药，主要用于严重的细菌感染和严重的过敏性疾病、各种血小板减少性紫癜、粒细胞减少症、严重皮肤病、器官移植的免疫排斥反应、肿瘤的治疗及对糖皮质激素敏感的眼部炎症等。本文研究了泼尼松龙对小胶质细胞被脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活时所分泌的趋化因子RANTES的影响。
1 材料与方法
1.1 实验试剂 泼尼松龙和LPS为美国 Sigma 公司产品，细胞培养液用的MEM(minimum essential medium)为美国Gibco BRL公司产品， RANTES ELISA 试剂盒为美国 R&D Systems 公司产品。
1.2 方法 取10只新生小鼠(1-2d龄)，在无菌条件下，剪开颅骨，取出脑组织[7]。分离后的细胞用100mL/L热灭活胎牛血清的MEM培养液培养10d后使用。细胞接种于48孔培养板(3.5×105细胞/mL，0.2mL/孔)中12h后进行实验。实验可分为空白对照组(正常细胞)、LPS处理组(在培养液中加入100μg/L的LPS)、泼尼松龙组(在培养液中加入10μmol/L的泼尼松龙)、试药组(LPS+泼尼松龙)，并继续培养12h后，用相应的 ELISA试剂盒来测定趋化因子RANTES含量。
1.3 统计学处理 实验各项数据用均数±标准差表示，采用t检验进行统计学处理分析。P0.01被认为有统计学意义。
2 结果
2.1 LPS对小胶质细胞分泌RANTES含量的影响 如图 1所示，LPS能高度激活小胶质细胞并且能使RANTES分泌增加。在MEM培养液中培养小胶质细胞，培养液中添加不同质量浓度的LPS(0、100、500、1000μg/L)，用ELISA法测定细胞外液所分泌的RANTES的含量。LPS处理后6h时细胞培养液中RANTES含量较空白对照组有明显增高，呈时间依赖性(图1)。
图1 LPS对小胶质细胞分泌RANTES含量的影响（略）
Fig.1 LPSinduced RANTES production in microglia
A: Cultured microglia were incubated with indicated concentrations of LPS for 12h; B: The culture medium was added with LPS (100μg/L) and the microglia were incubated for 3, 6, 12 and 24h. The supernatants were collected and assayed for RANTES protein accumulation by ELISA
2.2 泼尼松龙对LPS诱导的RANTES含量的影响 培养液中添加LPS (100μg/L)与 10 μmol/L的泼尼松龙后，再培养12h，测定细胞外液所分泌的RANTES 的含量。结果显示，泼尼松龙明显抑制RANTES分泌，与LPS组比较，差异具有统计学意义(P0.01，图2)。